第九十六期 单抗、病毒、疫苗纯化新神器--东曹TOYOPEARL Sulfate-650F

2017年07月27日source:管理员
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一、TOYOPEARL Sulfate-650F的简介

1. 带有硫酸根官能团的阳离子交换填料

• 官能团为硫酸根(SO4-) ,与S-、SP-和CM-等类型相似,同为阳离子交换填料。

• 对抗体等蛋白有很高的吸附载量。


2.
可有效去除抗体中的多聚体

• 相较于其他阳离子交换填料,对多聚体有着更高的分离效果。

• 在pH低于5.0、并含有0.15 mol/L的NaCl缓冲液中仍然可以结合抗体,具有耐盐性。

• 可作为Protein A层析的后续纯化步骤。


3.
有类似于肝素亲和填料的分离纯化效果

• 可以应用于AT-III和其他相关蛋白的分离纯化。

• 有望应用于病毒和疫苗的分离纯化。


4.
适用的缓冲液pH范围

• 一般可以用于pH 4-12的缓冲液中。

• 可以用pH 3-13的清洗液进行短时间的CIP处理。

二、TOYOPEARL Sulfate-650F的基本参数

性能指标

规格参数

蛋白吸附载量

静态

动态

≥114g/L(human IgG)

≥95g/L

离子交换容量

≥0.53eq/L

粒径

≥80%(30-60μm)

菌落总数

≤100 CFU/ml

内毒素等级

≤10.0 EU/ml

不溶物

≤0.2%(干胶)

异物(colored)

≤6 颗粒

出货溶剂:含0.2mol/L醋酸钠的20%乙醇溶液


三、
TOYOPEARL Sulfate-650F适用样品


• 单克隆抗体

• 血浆蛋白、凝血因子

• 病毒、VLP、疫苗

• 重组蛋白

• 碱性蛋白

四、TOYOPEARL Sulfate-650F的主要特点


• 高载量

• 多聚体分离

• 耐盐的阳离子交换填料

• 与肝素亲和作用相似(硫酸根官能团)

五、TOYOPEARL Sulfate-650F的应用条件


1. 单克隆抗体多聚体的分离纯化

• 对IgG可达到100 g/L的高载量。

• 可以作为Protein A亲和层析的后续纯化步骤。


2.
在pH 5 以下具有耐盐性

• 在pH 4.7、0.15 mol/L NaCl的缓冲液中可以对样品进行吸附。

• 在Protein A 亲和层析或前处理后可以直接进行上样。


3.
硫酸根官能团的特异性相互作用

• 与肝素亲和层析相似,可以与凝血因子、疫苗或病毒结合。

• 可以用0-1 mol/L的NaCl进行盐梯度洗脱。

• 与竞争对手的Sulfate填料具有类似的吸附性能,但是Sulfate-650F具有更高的吸附载量(某些填料由于孔径小,所以蛋白只能结合在填料的表面)。


4.
常用的分离条件

• 上样缓冲液的pH要控制在5.5以下。

• 优化缓冲液的pH和盐浓度能够获得更好的分离效果。

• 当缓冲液的pH为4.2时,即使在0.3mol/LNaCl的缓冲液中也能够获得很高的吸附载量。


六、多种不同的阳离子交换填料对单体和多聚体的分离度比较





在
pH 5.5的缓冲液中,mAb单体和多聚体回收率的比较


七、
TOYOPEARL Sulfate-650F在类似于肝素亲和填料方面的应用展望

1. 类似于肝素亲和填料的分离纯化作用*

• 凝血因子:Factor VII、Factor IX、Factor X、凝血酶、AT-III

• 组织纤溶酶原激活物(TPA)

• 脂肪酶、核酸酶有关(如限制性内切酶)、胶原酶、脂蛋白


2. 利用硫酸根官能团的相互作用*

• 病毒、疫苗

*目前使用TOYOPEARL Sulfate-650F纯化的除了核糖核酸酶A和AT-III以外,暂时没有其他实例。


八、单克隆抗体纯化工艺实例

实例1.



实例2.



实例3.



九、订货信息

货号

描述

023468

TOYOPEARL Sulfate-650F, 250ml

023469

TOYOPEARL Sulfate-650F,1L

023470

TOYOPEARL Sulfate-650F,5L

023471

TOYOPEARL Sulfate-650F,50L

023472

ToyoScreen Sulfate-650F, 1ml×6

023473

ToyoScreen Sulfate-650F, 5ml×6



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