第一百零九期采用TSKgel色谱柱分析保健食品中免疫球蛋白IgG

2018年07月31日来源：管理员

IgG是免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）的缩写，是血清主要的抗体成分，约占血清Ig的75%。其中40～50%分布于血清中，其余分布在组织中。IgG是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白。IgG的功能作用主要在机体免疫中起保护作用，大多数抗菌、抗病毒；应对麻疹、甲型肝炎等，能有效地预防相应的感染性疾病。免疫球蛋白分为五类，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。

免疫球蛋白IgG，目前已作为功效成分添加于保健食品中，该成分对于增强免疫力、调节动物体的生理功能和某些特定物质的代谢等均有一定效果。

食品安全国家标准GB/T 5009.194-2003中的IgG检测法，是根据高效液相亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH 2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。

下文中采用了日本东曹公司的亲和色谱柱 TSKgel Protein A-5PW，参照GB/T 5009.194-2003，对初乳素样品中的IgG含量进行了分析。

TSKgel Protein A-5PW 是一款亲和色谱分析柱，在多孔亲水性的聚合物基质填料表面键合了重组Protein A官能团。

表一 TSKgel Protein A-5PW色谱柱参数表

孔径	100 nm
粒径	20 µm
官能团	重组Protein A

  色谱柱：TSKgel ProteinA-5PW (4.6 mmI.D.×3.5 cm)
  流动相A：pH 6.5, 0.05 mol/L磷酸盐缓冲液
      流动相B：pH 2.5, 0.05 mol/L甘氨酸盐酸盐缓冲液
      流速：0.4 mL/min
      柱温：35 ℃
  进样体积：20 μL
      检测器：UV 280 nm

表二梯度洗脱表

时间（min）	流速（ml/min）	A（%）	B（%）	梯度
0	0.4	100	0	-
4.5	0.4	100	0	6
5.5	0.4	0	100	6
15.0	0.4	0	100	6
15.5	0.4	100	0	6
22.0	0.4	100	0	6

表三采用TSKgel ProteinA-5PW 色谱柱分析初乳素中IgG样品峰参数结果

编号	名称	保留时间（min）	理论塔板数	分离度
2	IgG	9.08	35565	18.99

分析结果表明，IgG与前面杂质峰的分离度Rs为18.99，两次进样测定结果的算数平均差值与算术平值比值为0.26%，完全满足国标中规定的检测要求。

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第一百零九期 采用TSKgel色谱柱分析保健食品中免疫球蛋白IgG

第一百零九期采用TSKgel色谱柱分析保健食品中免疫球蛋白IgG