第 154 期 为什么液相色谱流动相常用的是甲醇和乙腈

相信经常使用液相的老师们，应该每天都在跟甲醇和乙腈打交道吧。但是您知道，为什么液相色谱流动相最常用的是甲醇和乙腈吗？

当然，液相色谱的流动相还有水、以及添加的一些酸、碱或者缓冲盐。但是我们今天只讨论有机相这个部分。

要回答这个问题，那就得要了解一下液相色谱对于溶剂的一般要求是什么。

一、溶解度

首先，被分析的样品在流动相中必须对有一定的溶解度，如果样品在流动相中不溶解，那么即使你使用了其他溶剂将样品溶解，但只要样品一进入液相系统，接触到流动相，就有可能会析出，堵塞系统，加大了进行分析的难度。

绝大多数时候，都建议采用流动相来溶解和稀释样品。如果用来稀释样品的溶剂跟流动相的洗脱强度差距比较大的时候，就可能造成样品出峰拖尾的现象，我们把这个现象叫做液相色谱的“溶剂效应”。

溶剂效应也叫做“溶剂化作用”。是指液相反应中，溶剂的物理和化学性质影响反应平衡和反应速度的效应。可能造成色谱峰展宽、分叉、保留时间漂移、峰面积变化，双峰等现象。与此同时，较早洗脱的峰出现前沿或分叉，较晚洗脱的峰峰形正常。

二、腐蚀性

其次，流动相溶剂不能对液相系统有腐蚀性。

液相系统中与流动相接触的管路大多数情况下都是不锈钢的，它具有很强的抗腐蚀性。但是有些溶剂对于不锈钢却有很强的腐蚀性，比如氯仿，以及可能含有过氧化物色谱级醚等等。

有些时候，我们也会使用PEEK材质的管路和接头，因为它们安装拆卸起来比较方便。虽然PEEK材质也有很好的化学惰性，但是长期使用二甲基亚砜、二氯甲烷及四氢呋喃等溶剂的时候，也会出现变脆和破裂的情况。

三、紫外吸收

另外，液相流动相溶剂对于紫外线是应该是透明的。因为液相色谱中的大多数样品的检测，都是使用紫外检测器来进行的，这样就不会对我们要检测的样品产生干扰。

但是对于低于 220nm 的低紫外波长的检测，这可能是个问题，因为很难找到完全透明的溶剂。

如果在你选取的检测波长下，使用的流动相溶剂有着一定的紫外吸收，也就是说它不是完全透明的，那么，检测的特异性就不那么强了，样品定量结果的线性也会受影响。

当然，如果使用的是梯度洗脱的条件，那么最直接的现象就是基线的漂移了。

从这个角度来看，使用乙腈是更加优于甲醇的。因为乙腈的紫外截止波长是190nm，而甲醇是205nm。在低波长的检测中，乙腈可以提供更加平稳的基线和更好的定量结果。

四、低粘度

此外，流动相溶剂应该是低粘度的。

如果流动相粘度比较高，同样的流速条件下，对系统产生的压力就更高。在越来越追求快速分析的今天，液相系统所能提供的最高压力已经是液相的评判标准之一了。

所以粘度越低的流动相，对系统的压力要求越低，也就更适合快速高效的液相分析。

从这方面来看，乙腈也要比甲醇好。甲醇与水混合的时候，粘性会变得更高。使用过甲醇和水走过梯度方法的老师肯定能直观地感受到这一点。

综合以上的液相色谱对于流动相溶剂的要求，甲醇和乙腈就脱颖而出，成为了液相色谱最最常用有溶剂了。
    当然，在做GPC分析的时候，我们还会用到四氢呋喃（THF）。在做正相分析的时候，也会用到正己烷和异丙醇。

五、不易燃且低毒性

在理想情况下，流动相溶剂还应该是不易燃且低毒性的。前面一点是从实验室的安全性来讲，而后一点是对于液相色谱使用人员的健康保障的角度来看的。

而在这个方面，虽然甲醇和乙腈应该都算是毒性较低的溶剂，但是相比起来，还是乙腈的毒性更大一些，而且可以透过皮肤吸收。所以从操作人员健康保障的角度来看，甲醇更为安全。